仪器百科 | 最全分光光度计概况组件原理及应用介绍

在视频中,除介绍了分光光度计组件外,还可以看到分光光度法的基本概念。解释了操作分光光度计的程序,讨论了分光光度计在生物学研究中的几种用途,最后,介绍了微量分光光...


在视频中,除介绍了分光光度计组件外,还可以看到分光光度法的基本概念。解释了操作分光光度计的程序,讨论了分光光度计在生物学研究中的几种用途,最后,介绍了微量分光光度计,以及它在测量蛋白质和核酸质量和数量方面的优势。

分光光度计是一种在科学研究中经常会用到的仪器。它用来定量测量分光光度计中穿过样品的光线有多少被化学物质吸收。

分光光度计是一种在生物,化学,临床和环境研究中普遍使用的仪器。

分光光度法是通过在分光光度计中使光束通过样品来测量化学品可以吸收多少光。

通过测量检测到的光强度,该方法可用于确定样品中溶质的浓度。

分光光度法的概念

发送到样品的光束由光子束构成。

当光子遇到样品中的分子时,分子可以吸收其中的一些分子,减少光束中的光子数量并降低检测信号的强度。

透射率是穿过样品的光的一部分。它被定义为在入射光强度下穿过样品的光强度。

吸光度与透射率相反,对应于分光光度计测量的量。

根据吸光度,溶液样品中的浓度可以从比尔 - 朗伯定律确定,其表明吸光度和样品浓度之间存在线性关系。根据Beer-Lambert定律,吸光度是吸收系数的乘积,吸收系数是给定波长下溶质吸收的光量的量度,是光通过的距离。样品,或行进距离,以及溶质的浓度。通常,测量吸光度的目标是测量样品的浓度。

分光光度计的组件

每个分光光度计包含一个光源,一个准直器(透镜或一个传输强烈和直线光束的聚焦装置),一个单色器,用于分离不同波长的光束,以及一个长度选择器 用于选择所需波长的波或槽。 在该视频中呈现的分光光度计中使用的光的波长在紫外和可见光的范围内。 分光光度计还包含样品架,光电探测器和显示探测器结果的屏幕。

最近的分光光度计直接耦合到计算机,其中可以控制实验参数并显示结果。

分光光度计的工作原理

进行分光光度测定时,请务必采取适当的预防措施,例如戴手套,具体取决于您使用的生物或化学溶液的类型。

在测量样品的紫外-可见光谱之前,打开设备并让灯和电子元件加热。

准备相同溶液的空白样品,具有相同的pH和相似的离子强度,但没有分析的组分;由于比色皿和溶剂可以分散光,因此分析该样品是必要的步骤。

传统的分光光度计样品架设计用于容纳塑料和石英碗。将原始溶液吸移到碗中。

擦去任何指纹并溅到碗的外侧后,将比色杯正确插入样品架并关闭杯盖门。

永远不要忘记关上门,因为从开放式分光光度计发出的紫外线辐射会损坏眼睛和皮肤。

编程将传输到样品的所需波长或波长范围。这取决于分析的组分可以吸收的最佳波长。然后,通过测量空白样品使机器归零,这将减去由于样品缓冲液引起的底部吸光度。

根据您正在进行的分光光度实验的类型,可能需要在样品测量之前生成标准曲线,从中可以最终确定样品中分析的化合物浓度。

让样品达到适当的温度并轻轻混合,以免引入气泡。然后可以将样品直接添加到机器内部的碗中,并且可以进行读数。

对样品进行吸光度测量后,对实验进行适当的计算;例如,确定浓度或酶活性水平。

分光光度计的应用

分光光度计的通常用途之一是测量细胞密度。细胞密度测量可用于产生细菌的对数生长曲线,从中可以确定重组蛋白整合的最佳时间。

分光光度计还可用于测量化学反应速率。在该实施例中,吸光度用于监测酶促反应,通过452nm的中间反应随时间消失。可以通过将数据与适当的等式匹配来计算该酶促步骤的速率。

微量分光光度计的引入消除了对样品架的需求。这些分光光度计使用表面张力来保持样品。

微量分光光度计是测量昂贵的小体积样品(如生物分子,包括蛋白质和核酸)的质量和浓度的最佳选择。

蛋白质在280nm处的吸光度取决于在色氨酸,酪氨酸和苯丙氨酸中发现的芳族侧链的含量,以及两个半胱氨酸之间存在的二硫键。

蛋白质的浓度可以由其在280nm处的吸光度和其吸收系数确定,该吸收系数基于氨基酸的组成。

DNA和RNA在260nm处具有最大吸光度,从中可以确定它们的浓度。还可以从吸光度读数与特定波长的比率来评估核酸的纯度。

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